分析了多路频分复用并行显微荧光探测的基本原理，即把激发光分成多束，对每一束进行不同频率调制，聚焦到生物样品的不同位置，激发产生相应频率的荧光信号，再对光电倍增管（PMT）接收的荧光信号进行分频解调，实现实时、并行和高分辨率的探测技术。搭建了激发光源为405 nm近紫外激光的双路方波调制荧光显微探测系统，实验探测了老鼠神经细胞显微形态，分析解调了双点荧光能量随时间变化的曲线。并研究了荧光显微成像系统放大率、时间分辨率等技术参数，还通过数值分析给出了避免各通道间信号串扰的条件。