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[生物化学实验] 醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白质 实验报告
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上传时间: 2009-05-19
详细说明：[目录]
一、实验目的
二、实验原理
三、实验器材
四、实验试剂
五、实验操作
六、实验数据
七、实验讨论与总结
[原文]
一、实验目的
掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离蛋白质的原理和方法
二、实验原理
蛋白质是两性电解质。在pH值小于其等电点的溶液中，蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动；在pH值大于其等电点的溶液中，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动。血清中含有数种蛋白质，它们所具有的可解离基团不同，在同一pH的溶液中，所带净电荷不同，故可利用电泳法将它们分离。
血清中含有白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等，各种蛋白质由于氨基酸祖坟、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同，在电场中迁移速度不同。由表可知，血清中5种蛋白质的等电点大部分低于pH值7.0，所以在pH8.6的缓冲液中，它们都电离成负离子，在电场中向阳极移动。
在一定范围内，蛋白质的含量与结合的燃染料量成正比，故可将蛋白质区带剪下，分别用0.4mol/L NaOH溶液浸洗下来，进行比色，测定其相对含量。也可以将染色后的薄膜直接用光密度计扫描，测定其相对含量。
肾病、弥漫性肝损害、肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、慢性炎症、妊娠等都可以使白蛋白下降。肾病时α1、α2、β球蛋白升高，γ-球蛋白降低。肝硬化时α2、β-球蛋白降低，而α1、γ-球蛋白升高。
三、实验器材
1、醋酸纤维薄膜（2cm*8cm，厚度120μm）
2、人血清；
3、烧杯及培养皿 数只；
4、点样器；
5、竹镊子；
6、玻璃棒；
7、电吹风；
8、试管 六只；
9、恒温水浴锅；
10、电泳槽；
11、直流稳压电泳仪；
12、7220型分光光度计；
13、剪刀
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